「神经干细胞」原代培养总结
神经干细胞（NSCs）是一种具有自我更新能力和分化为多种神经系统细胞类型（如神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞）潜能的一类干细胞。它们在形态上通常是圆形或椭圆形的，但在培养过程中，当它们开始分化时，可能会展现出更多样化的形态，如神经元可能会长出轴突和树突，而胶质细胞则可能呈现出星状或其他形态。
实验准备
-
仪器设备：超净台、离心机、CO2培养箱、体视镜。
-
器皿耗材：15mL离心管、吸管、T25培养瓶、6孔板、无菌培养皿、无菌眼科镊、无菌眼科镊剪、无菌解剖盘等。
-
实验动物：孕13.5天的SD母鼠，或孕12.5天的C57BL/6小鼠（以见栓那天的清晨计为0.5天）。
-
实验试剂：使用专门为神经干细胞培养设计的培养基，如OriCell®大鼠神经干细胞完全培养基（无血清），OriCell®小鼠神经干细胞完全培养基（无血清）（以下简称完全培养基），其通常含有必要的生长因子和营养物质，可促进神经干细胞的高效培养。
-
实验条件：所有操作应在无菌条件下进行。
取材操作
-
准备数个无菌的培养皿，并放上无菌的1×PBS。准备1块6孔板，装入2mL完全培养基。
-
CO2窒息处死母鼠，75％酒精浸泡2-3min。用普通镊子取出母鼠，将母鼠置于无菌解剖盘上，使其腹部朝上。
-
用眼科剪在腹部的中间位置横切，沿着横切的方向用眼科剪继续剪，尽量剪开一些，充分暴露母鼠的腹膜。
-
在母鼠的下腹部（靠近尾巴处）横着剪开腹膜，可见胎鼠。
注意：大鼠为双角子宫。
-
在子宫系带处剪断，将子宫提离小鼠腹部，放到装有PBS的培养皿中，期间可多洗子宫几次。然后将胎鼠逐个分离出来，并转移到另外一个装有PBS的培养皿中。
注意：洗干净残留的血。
-
把胚胎置于体视镜下，去掉骨膜层，使胎脑暴露，找到GE区，去掉多余组织。
-
将分离出来的海马区移入无菌EP管中，加入200μL完全培养基。
-
用200μL的移液枪仔细吹打10次左右，直至海马组织解离成单细胞悬液。
注意：在吹打过程中。尽量不要产生气泡。
-
将吹散的细胞悬液加入预先准备的6孔板中，然后放回培养箱中。
注意：一个胎鼠的海马体接种6孔板1个孔，P0代细胞量少，若接种面积较大，神经球的量少且成球小。
细胞培养
OriCell®小鼠神经干细胞
悬浮培养步骤：
-
48h后可以进行首次传代，将悬浮的神经球上清收集至15mL离心管中离心。
-
经140g，离心5min后，去除上清液。
-
加入新鲜培养基，用1mL枪轻柔吹打细胞沉淀，充分将细胞团吹散成单个细胞，混匀后接种T25培养瓶。
-
当胎鼠神经干细胞出现神经球较大（神经球中央黯淡）或部分神经球出现贴壁分化时需立即传代。一般情况下，胎鼠神经干细胞2~3天传代一次。
观察和鉴定
定期使用显微镜观察细胞的形态和生长情况，并通过特定的标记物（如神经特异性蛋白Nestin）来鉴定神经干细胞。
质量控制
定期检测细胞是否有污染（如细菌、真菌、支原体或内毒素等检测），并确保细胞特异性蛋白表达稳定性和诱导分化潜能。
填写需求描述给我们
工具快速咨询
400-680-8038
info@oricellbio.cn
