如何做好THP-1的细胞培养与基因编辑
THP-1细胞是一种人单核细胞白血病细胞系,源自一位急性单核细胞白血病患者的外周血液,于1980年被建系,属于悬浮细胞。THP-1细胞具有类似人原代单核细胞的形态和功能特征,包括细胞分化标记。它们可以被诱导分化成单核/巨噬细胞,因此常被用作体外细胞模型,用于研究单核/巨噬细胞的功能、机制和信号通路等,尤其在免疫学和毒理学研究中应用广泛。
细胞名称:THP-1(人单核细胞白血病细胞系)
OriCell®细胞货号:H3-0901
OriCell®培养基货号:CMH3-0901(500mL),DMH3-0901(200mL)
生长特性:悬浮圆形生长,偶有小聚团属于正常现象
培养条件:RPMI-1640+10%FBS+0.05mM β-mercaptoethanol
培养环境:95%空气+5%二氧化碳;37℃
THP-1细胞镜下形态
THP-1细胞对乳胶微粒和致敏红细胞有吞噬作用,细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白,表达C3R和FcR,并可在化学诱导剂的诱导下分化成为巨噬细胞,模拟体内单核细胞向巨噬细胞的转化过程。该细胞也可作为转染宿主,常用于免疫学和毒理学研究。
巨噬细胞分化模型
可以通过特定的化学诱导剂如佛波酯(PMA)诱导分化为巨噬细胞。这些分化后的巨噬细胞可以进一步极化为M1型(促炎)或M2型(抗炎)巨噬细胞,用于研究巨噬细胞在炎症反应、免疫调节和抗肿瘤等方面的功能。
THP-1细胞来源的M1型巨噬细胞是一种典型的炎症模型,能够通过合成和分泌促炎因子如IL-1β、IL-6、TNF-α等介导炎症反应。
THP-1细胞系被广泛用于研究免疫调节方法,包括评估化合物在激活和静止状态下的免疫调节作用。
THP-1细胞系可用于识别潜在致敏或炎症化合物的毒理学研究,尤其是在研究免疫调节方法的体外细胞模型方面。
通过基因编辑技术,THP-1细胞可以被用来构建基因敲除模型,以研究特定基因在免疫和炎症疾病中的作用。
THP-1细胞系还可以用于肿瘤相关研究,例如通过敲除特定基因如CXCR4,研究其对乳腺癌细胞迁移的影响。
该细胞在培养过程中,可能会有少量细胞聚集成小团生长,属于正常现象。传代时可以轻轻打散,如少许细胞已贴壁则传代时丢弃,小团生长的细胞可正常传代培养。传代时可以使用半换液法。
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取6mL完全培养基于离心管中开始复苏;
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水浴锅融化至米粒大小冰块,终止水浴;
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转移至离心管中离心;
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重悬细胞后接种于面积较小的孔板中;
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24h后观察细胞存活情况,细胞状态恢复之前不用换液。
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轻轻摇晃使细胞分散均匀,再吸取一半的培养基至新的培养皿中;
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原培养皿和新的培养皿再加入等体积的新鲜培养基;
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半换液法传代1-2次后需离心传代。
细胞冻存
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收集细胞至离心管中,离心;
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加入冻存液重悬细胞,转移至冻存管中;
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冻存管放入4℃预冷的程序性冻存盒,再放入-80℃冰箱过夜;
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第二天转移至液氮保存。
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对培养密度较为敏感,培养、传代时请注意保持细胞密度在合适的范围,不可太稀;
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复苏后尽量接种至面积小一些的孔板中,有利于细胞恢复状态;
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冻存时需提高密度,建议3-5×106细胞量冻存一管,冻存前一天换液;
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避免频繁离心换液。
THP-1细胞系的基因修饰包括基因敲除、点突变、基因敲入、过表达和干扰等,赛业生物通过优化THP-1的转染条件,实现THP-1基因编辑单克隆交付,可显著提高实验的准确性和可靠性,为科学研究提供更坚实的基础。
基因敲除
基于智能的细胞基因编辑系统,赛业生物可提供THP-1的KO细胞定制服务,交付单克隆纯合子。我们使用优化的转染体系将RNP直接递送到细胞内,gRNA切割效率高达90%以上,相比于质粒和病毒等介导的方法,切割效率提升明显,脱靶效率明显降低,能更精准地切割目标DNA序列。
点突变
基于智能的细胞基因编辑系统,我们可提供精准、高效的THP-1定点突变和KI细胞定制服务。通过优化的α-donor体系将人源化的Cas蛋白、gRNA和donor三组分转染至目的细胞,产生高效同源重组,HDR高达49%,实现单克隆纯合子交付。
稳转株
赛业生物优化升级了转染载体系统,凭借多年细胞生物学经验,建立了一套成熟稳定的基因过表达实验体系,能提供THP-1稳定表达外源基因或RNA干扰元件的稳定Cell Pool或单克隆细胞株,可获得蛋白高表达10倍以上。
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细胞转染前确保状态圆亮活率较高,细胞密度70%左右;
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转染前轻轻吹散聚团的细胞;
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转染后需等细胞状态恢复正常再进行操作。
赛业生物 THP-1细胞产品服务
赛业OriCell®为科研人员提供稳定且质量可靠的THP-1(货号H3-0901)细胞供应及支持,细胞通过细菌、真菌、支原体、内毒素检测及STR鉴定,还可提供细胞所需的各类培养试剂。依托成熟稳定的细胞技术服务平台,赛业生物可提供THP-1细胞系的基因修饰包括基因敲除、点突变、基因敲入、过表达和干扰等,以及细胞常规功能及特性检测等服务。以下推荐THP-1细胞相关产品服务,还有年终给力福利不容错过!欢迎文末联系我们咨询订购。
产品名称 |
详情 |
THP-1细胞系现货 |
货号H3-0901,规格1×106 |
THP-1细胞系完全培养基 |
货号CMH3-0901(500mL),货号DMH3-0901(200mL) |
THP-1基因敲除细胞株现货 |
基因敲除PML、TNFAIP3、VNN1、DDX3Y、IL23R、ACTN4、ARPC5L、DNMT3B、Tbx15等多种基因,详情请咨询 |
标准级胎牛血清 |
货号FBSST-01033,规格500mL,乌拉圭血源 |
通用血清型非程序冻存液 |
货号NCRC-10001,规格20mL/50mL |
通用型无蛋白非程序冻存液 |
货号NCPF-10001,规格20mL/50mL |
Easy Transfection Reagent |
货号ETFR-10001,规格250μL*2 |
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